樣品的大量制備在時間、資源和未知性潛在問題方面需要花費的的成本很高。這就是為什么在進行規模實驗之前進行小試分析，例如選擇合適的固定相和流動相，以此來實現效益最大化。對于那些需要進行制備型HPLC的用戶來講，在較小規模上篩選純化參數的完美方式是采用分析型HPLC。今天，“小步”同學講向您展示為什么這種技術是有利的，以及是如何實現分析型HPLC與制備型HPLC的轉化。

在之前的文章中“小步”同學向大家描述了如何使用薄層色譜 (TLC) 來篩選合適的分離條件。在那篇文章當中，TLC 可以被視為小試實驗。

但是，如果您計劃使用制備型 HPLC 進行大規模純化，那么分析色譜則會等效于 TLC，成為您進行下一步的有效工具。

分析色譜有助于選擇流動相和固定相，同時節省時間、成本并減少大規模制備過程中可能發生的潛在意外因素。這是實驗者喜歡這種方式的一個很好的原因。

是的，分析型 HPLC 需要全自動設備，而且設備成本較昂貴。但與 TLC 相比，分析色譜可以使用梯度進行，這對用戶非常有益。C18 反相色譜柱可以幫助提高過程的成本效益。這是因為 C18 固定相在用有機溶劑洗滌后可以重復使用，以去除強保留的雜質等。相反，Silica正相色譜柱在洗脫之后不能重復使用。

當您編輯分析色譜方法過程時，您應該根據制造商的建議選擇樣品濃度和流速。通常情況下，建議載樣量為 1-10mg，流速則為 0.1-10ml/min。

分析色譜的目的是在最短的時間內以最大的負載量實現目標化合物與其余雜質等基線分離。

一旦您對分析結果感到滿意，您可以考慮直接運用制備型 HPLC 進行大量制備了。用戶喜歡分析色譜的另外一個原因是，可以借助一些公式直接將分析色譜的方法轉移到制備色譜上。

最簡單的方法是保持分析柱填料的粒徑、長度與制備柱相同。如果您能做到這一點，您可以使用以下公式來確定載樣量（體積或濃度）、流速和直徑：

載樣A = 載樣B x（直徑A/直徑B）2 x（長度A/長度B）

流速A = 流速B x（直徑A/直徑B）2

其中：A 代表制備柱當量；B 代表分析柱當量

除此之外，您依然可以使用相同的梯度方法（溶劑和時間的比率）。

并且，“小步”同學還建議您從小一些的制備型 HPLC 色譜柱開始，如果需要的話，在之后的實驗中再升級到更大的尺寸。

希望這篇文章可以幫助您成功完成制備型 HPLC 的樣品純化，從而避免更多的時間與資源的浪費！

好了，今天“小步”同學就介紹到這里，我們下期再見！