① 細胞克隆性檢測的意義

細胞克隆性檢測是指通過檢測細胞群體中是否存在單克隆性增殖，來判斷是否存在腫瘤或其他克隆性疾病的診斷方法。克隆性檢測在疾病診療中具有重要意義，尤其是在血液系統腫瘤、實體瘤和免疫相關疾病的診斷、治療和預后評估中發揮著關鍵作用。例如，在淋巴造血系統疾病中，克隆性檢測可以區分反應性增殖（如感染引起的免疫細胞增生）和惡性克隆性疾病（如淋巴瘤和白血病）。此外，在自身免疫病中，克隆性檢測可用于評估異常T/B細胞的擴增情況，有助于鑒別疾病類型。

② 克隆性檢測方法

目前，細胞克隆性檢測的主要方法包括基因重排分析（IGH/TCR重排檢測）、免疫電泳、熒光原位雜交 (FISH) 、單細胞測序和流式細胞術等。

基因重排分析

利用PCR擴增免疫球蛋白重鏈 (IGH) 或T細胞受體 (TCR) 基因的可變區，檢測克隆性擴增。

優點：靈敏度高，可用于低豐度克隆檢測；適用于T/B細胞克隆性分析。

缺點：無法提供細胞形態或表型信息；需要特定的引物設計以及高質量DNA，可能受樣本降解影響。

免疫電泳

通過電泳分離血清中的免疫球蛋白，檢測是否存在單克隆性免疫球蛋白。

優點：可以快速、高效地對多種蛋白同時進行檢測，適用于多發性骨髓瘤等疾病的診斷。

缺點：靈敏度相對較低，且不能直接檢測細胞克隆性。

熒光原位雜交

利用熒光探針檢測細胞核中特定基因或染色體異常（如BCL2、MYC重排）。

優點：特異性高，可直接觀察染色體異常，適用于惡性克隆性腫瘤。

缺點：檢測通量有限；對某些克隆擴增的敏感性不足。

流式細胞術

相比上述方法檢測細胞克隆性，流式細胞儀檢測的最大優勢在于，可以同時檢測多個標記物，提供更全面的免疫表型信息，通過不同抗原對異常細胞進行設門再精確分析異常細胞的克隆性，特異性更高，適用于淋巴瘤、白血病的克隆性鑒定。

③ 流式如何實現細胞克隆性檢測

在B細胞和T細胞淋巴細胞的成熟過程中，抗原受體基因——免疫球蛋白 (IGH) 和T細胞受體 (TCR) 通過在可變 (V) 和連接 (J) 區域，或者在多樣性 (D) 區域發生基因重排，從而產生了適應性免疫反應的不同抗原結合部分，因此造就了淋巴細胞抗原特異性受體的廣泛多樣性，也是免疫系統應對多種病原體的基礎。

體細胞基因重排組成TCR示意圖

據估計，IGH基因或TCR基因可發生超過200萬次重排。兩個正常淋巴細胞發生相同重排的可能性可以忽略不計，但是惡性淋巴細胞來源于單個腫瘤細胞，往往表現出相同的IGH或TCR基因重排。因此通過流式細胞術進行細胞IGH或TCR是否存在限制性，便可用于檢測淋巴瘤等疾病的細胞單克隆性。

TCR是T細胞表面的特征性標志，根據TCR組成鏈的不同，可將T細胞分為αβ T細胞和γδ T細胞，其中αβ T細胞約占T細胞的95%~99%，γδ T細胞約占1%~5%。由于αβ T細胞占T細胞的絕大多數且重排率更高，目前流式主要通過對αβ T細胞的TCR的克隆分布檢測來評估T細胞克隆性，主要有兩種方案：TCR-Vβ受體庫檢測以及TRBC1/TRBC2檢測。

TCR-Vβ受體庫檢測

通過檢測TCR β鏈可變區 (TCR-Vβ) 受體的多樣性來進行克隆性檢測。正常T細胞TCR-Vβ抗原為多克隆，腫瘤細胞表現為單個克隆的優勢增生。貝克曼庫爾特生命科學公司提供的TCR-Vβ受體庫試劑盒（貨號：IM3497）包含了8組24個TCR-Vβ抗體，適合于所有流式細胞儀檢測。

檢測結果圖例

正常T細胞TCR-Vβ抗原分布

單克隆性T細胞的異常表達 

由于TCR-Vβ受體的種類比較多，該受體庫試劑盒的抗體種類僅覆蓋70%左右的T細胞克隆，如果TCR-Vβ家族總和過低，可能提示存在試劑盒無法覆蓋的TCR-Vβ克隆性，也可作為單克隆性的證據。

TRBC1/TRBC2檢測

與TCR-Vβ受體庫檢測的是TCR β鏈的可變區不同，TRBC1/2檢測的是TCR β鏈恒定區結構域的抗體。在TCR基因重排過程中，T細胞受體的β亞基恒定區 (TRBC) 僅有兩種多態性，即TRBC1或TRBC2，每個TCR以隨機和互斥的方式不可逆地選擇兩個恒定區域中的一個進行表達，類似于B細胞κ和λ，為多克隆表達。當某一TRBC群體的表達比例大于85%或小于15%時，則提示單克隆性表達。

檢測結果圖例

健康人外周血流式細胞術結果顯示，總T細胞、CD4+（青色）和CD8+（橙色）T細胞上存在多型TRBC表達

單克隆T細胞表達TRBC限制性圖例

相比TCR-Vβ受體庫復雜的操作，TRBC1/2檢測是更簡單高效的選擇。目前，貝克曼庫爾特生命科學公司也全新推出了TRBC1/2的檢測試劑，感興趣的小伙伴歡迎垂詢或訂購！如需要了解更多信息，請與貝克曼庫爾特公司的業務代表聯系！

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